關于科研人員來說ELISA試劑盒實驗的原理和操作過程并不生疏，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，操作過程中夾雜著洗刷和關閉過程。但是，即使是平淡無奇的洗刷和關閉，假如操作不合理，也會很大程度上影響實驗的度。實驗結束時咱們是否能取得有意義并且的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比，布景噪音會在很大程度上影響科研人員對成果的判別。
關于如安在實驗過程中下降ELISA試劑盒布景要素的影響，下面介紹一些過程關鍵。
洗刷很重要
洗刷過程看似很簡單無聊，本來很重要，由于假如未的材料(如非特異的抗體或檢查試劑)殘留在微孔板中，就會添加布景噪音。如有必要，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會阻撓非特異反應。假如布景過高，置疑洗刷不行，能夠測驗添加洗刷次數。
關閉更關鍵
關閉液的作用是讓不相關的蛋白占有微孔板中潛在的位點。這就下降了可發(fā)生信號的抗體非特異的時機。實驗過程中到達抗體只與意圖蛋白的目標。假如布景過高，置疑關閉不充分，能夠測驗運用更高濃度的關閉液，或恰當延伸關閉時刻。
假如您一直被布景疑問所困擾，那就應當花些時刻來優(yōu)化關閉液。這也許需求時刻，但也是值得的。目前主要有兩種類型的關閉液：蛋白和非離子型去污劑。運用的類型須取決于多個要素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的關閉液應下降非特異性，但它不應當與抗原、抗體或檢查試劑發(fā)作相互作用。
ELISA試劑盒zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種關閉液廉價、安穩(wěn)，在去除洗刷過程中的一些非特異上很有用。但它們只在存在時起作用，由于很簡單被洗掉。因而所有洗刷液中也有必要添加關閉液。請勿運用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會下降特異，發(fā)生假陰性。另一個挑選是運用蛋白和非離子型去污劑這兩種關閉液，后者可幫忙洗刷過程中的關閉。
蛋白關閉液則有所不一樣，是持久的。它們與敞開位點并關閉，ELISA試劑盒一起安穩(wěn)與微孔板的抗原分子。常用的蛋白關閉液包含牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有用攔截許多不一樣類型的分子相互作用。不過，它的缺陷在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。處理這個疑問的一種辦法是運用雞或魚的正常血清。
抗體濃度須優(yōu)化
一般咱們會模仿“實驗前輩”留下來的操作過程進行實驗，但是假如試劑稍有不一樣，則也許需求優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體會添加布景。為了避免這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。
檢查試劑要適當
另一點也很清楚明了：ELISA試劑盒切勿運用過多的檢查試劑。假如濃度過高，或者未正確稀釋，則會致使高布景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應參加停止液。
假如ELISA遇到了高布景，那么也無需太憂慮，順次檢查ELISA體系中的組分，并掃除也許存在的疑問。盡心優(yōu)化，信任很快就會有有意義并且的實驗成果。